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I、TSZ Elisa試劑盒步驟：

一、固定：

PBS 5min×3次 振蕩洗滌制作好的細(xì)胞爬片。

固定液覆蓋細(xì)胞，RT 靜置5min。

PBS 5min×3次 振蕩洗滌。

二、通透化：

通透液覆蓋細(xì)胞，RT 靜置30min。

PBS 5min×3次 振蕩洗滌。

三、封閉：

封閉液覆蓋標(biāo)本表面37℃孵育h。

四、一抗孵育：

一抗以合適濃度稀釋PBS，覆蓋標(biāo)本表面。

4℃孵育過(guò)夜，第二天37℃復(fù)溫h。

PBS 5min×3次 振蕩洗滌。

五、TSZ Elisa試劑盒二抗孵育：

fitC標(biāo)記二抗以合適濃度稀釋于PBS，覆蓋標(biāo)本表面。

37℃避光孵育<60min。

PBS 5min×3次 避光 振蕩洗滌。

六、染核：

新鮮稀釋Hoechst覆蓋細(xì)胞表面，RT避光靜置<0min。

PBS 5min×3次 避光 振蕩洗滌。

七、封片：

在干凈的載玻片上滴一滴封片劑，將爬片的細(xì)胞面扣在封片劑上。

八、鏡檢，4℃避光保存。

II、注：

、細(xì)胞密度要合適，狀態(tài)較好。

2、從孵育二抗開始要避光(關(guān)閉室內(nèi)日光燈即可)。

3、完成后及時(shí)鏡檢，照相;分別用不同波長(zhǎng)激發(fā)熒光，在Photoshop軟件下合成一張圖。

III、試劑配制：

、固定液：4%多聚甲醛/PBS：

4g多聚甲醛，50～80mlPBS，加熱至60℃，持續(xù)攪拌至*溶解，(通常需滴加少許n NaOH才能使溶液清亮)，定容00ml，RT保存。

2、通透液：0.5 %(v/v)TritonX-00/PBS

3、封閉液：正常山羊血清稀釋于PBS;或商品化封閉液成品。

4、Hoechst：Hoechst33258即可。

5、TSZ Elisa試劑盒封片劑：50%(v/v)甘油/PBS。