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TSZ Elisa試劑盒實驗中緩沖溶液等試劑的配置
點擊次數:1168 更新時間:2019-03-27

TSZ Elisa試劑盒實驗中的封閉液小知識

ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:

、ELISA實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;

2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。

4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數選擇前者。

封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結合上的明膠。

封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結合抗體或抗原的時候就不會產生非特異結合了,不會影響實驗的準確度。


ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎,ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總如下:
() ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

NaHCO3 .59克

NaHCO3 2.93克

加蒸餾水至000ml

(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.5M

KH2PO4 0.2克

Na2HPO4·2H2O 2.9克

NaCl 8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05% 0.5ml

加蒸餾水至000ml

(3) ELISA實驗稀釋液:

牛血清白蛋白(BSA) 0.克

加洗滌緩沖液至00ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~0%使用。

值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合保存。

為了保證ELISA實驗的準確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉污染。

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